جهانخانی و صفاریان (۱۳۸۲) در تحقیقی با عنوان واکنش بازار نسبت به اعلان سود برآوری هر سهم، محتوای اطلاعاتی سود برآوری هر سهم و تأثیر آن بر قیمت وحجم معاملات سهام در بورس تهران مورد بررسی قرار دادند. نتایج تحقیق نشان می دهد که سود برآوری هر سهم دارای محتوای اطلاعاتی بوده و باعث تغییر قیمت وحجم معاملات سهام شده است.
فصل سوم
روششناسی پژوهش
۳-۱ مقدمه
تحقیق، فرایند جستجوی منظم برای مشخص نمودن یک واقعیت نامعین است. از طریق این فرایند، میتوان درباره ناشناختهها به جستجو پرداخت و شناخت لازم را کسب کرد. در فرایند تحقیق به چگونگی گردآوری شواهد و تبدیل آن به یافته ها، روششناسی تحقیق گفته می شود. لذا شناخت علم و دستیابی به هدفهای آن میسر نخواهد شد، مگر زمانی که با روششناسی درست صورت پذیرد. از طرف دیگر، تحقیق از حیث روش اعتبار مییابد نه از حیث موضوع تحقیق. روش تحقیق هدایتگر جستجوهای علمی در جهت دستیابی به حقیقت است. هر پژوهشگر در آغاز، در پی مشکل یا مسأله است. مشکل یا مسألهای که پرسشهای زیادی را در ذهن پژوهشگر ایجاد و موجب پیدایش فرضیه می شود. پژوهشگر با جمعآوری اطلاعات و آمار مورد نیاز و تجزیه و تحلیل آنها سعی در ارائه پاسخی مناسب برای پرسشهای پژوهش و تأیید یا رد فرضیه های مطرح شده دارد. در انجام تحقیقهای علمی، جمعآوری اطلاعات و چگونگی تجزیه و تحلیل آنها اهمیت بالایی دارد. این عمل یک مقوله از فرآیندی است که طی آن، نظریه ها در قالب آمار و ارقام علمی تجلی پیدا نموده و ثمره آن به صورت کمّی جلوهگر و از این طریق میتوان الگوی نظری پژوهش را مورد سنجش و محاسبه قرار داد(شاهیسی، ۱۳۸۹).
در نهایت میتوان تحقیق را به این صورت تعریف کرد: تحقیق فعالیتی است هدفدار، منظم و طرحریزی شده که به منظور یافتن پاسخ سؤالی یا تأیید فرضیهای، درک و شناخت علل پدیدهای و یا کشف حقیقتی به کار میرود.
در این فصل، ابتدا روش پژوهش بیان شده است و در ادامه، جامعه آماری، حجم نمونه آماری و روش گردآوری و ابزار تجزیه و تحلیل داده ها تشریح شده اند. در پایان، روشهای آماری مورد استفاده برای تجزیه و تحلیل داده ها بیان شده است.
۳-۲ روششناسی پژوهش
پژوهش حاضر از نظر هدف؛ پژوهشی کاربردی میباشد؛ چرا که تأثیر تأمین مالی خارج از ترازنامه را از طریق مهمترین ابزار آن یعنی اجاره عملیاتی، بر واکنش سرمایه گذاران نسبت به اعلان سود را مورد توجه قرار داده است. در طبقه بندی از نظر نحوه گردآوری داده ها، به این دلیل که هدف پژوهش توصیف کردن شرایط و یا پدیده های مورد بررسی و همچنین شناخت بیشتر شرایط موجود است، توصیفی میباشد و به دلیل اینکه رابطه بین متغیرها مورد توجه است، از نوع همبستگی میباشد. همچنین از نظر نوع داده ها، کمّی و از نظر زمان اجرای پژوهش، مقطعی میباشد.
۳-۳ جامعه آماری و نحوه انتخاب شرکتها جهت آزمون فرضیه های پژوهش
در این تحقیق، تمامی شرکتهای پذیرفته شده در بورس اوراق بهادار تهران در بازهء زمانی سال ۱۳۸۷ تا پایان سال ۱۳۹۲ به عنوان جامعه آماری در نظر گرفته شده است. دلایل انتخاب جامعه آماری مذکور این است که سازمان بورس اوراق بهادار تهران اطلاعات نسبتاً جامعی در خصوص وضعیت شرکتها و روند عملکرد مالی و اقتصادی آنها دارد و میتوان گفت تنها منبع اطلاعاتی است که میتوان با بهره گرفتن از آن به منابع اطلاعاتی مالی شرکتها دسترسی یافت. از این رو، نمونه آماری به روش حذف سیستماتیک انتخاب شده است. در این روش ابتدا شرایطی جهت انتخاب نمونه تعریف شده و نمودهای فاقد شرایط مذکور از نمونه، حذف شده اند. دلیل استفاده از این روش و تعریف چنین شرایطی، همگون نمودن نمونه آماری با کل جامعه و امکان تعمیم نتایج حاصل از آزمونها به جامعه آماری میباشد. جامعه آماری تحقیق با توجه به شرایط و ملاحظات ذیل، محدود شده و نمونه آماری از آن استخراج شده است:
شرح | تعداد | |
جمع کل | اعضای جامعه آماری در پایان سال ۱۳۹۲ | ۴۷۰ |
محدودیت ۱ | اطلاعات و صورتهای مالی آن در دسترس نمی باشد. | (۳۸) |
محدودیت ۲ | طی سالهای ۱۳۸۸ تا ۱۳۹۲ شرکت از ابزار اجاره عملیاتی استفاده کرده باشد. | (۳۸) |
محدودیت ۳ | سال مالی شرکتها منتهی به پایان اسفند ماه هر سال نمی باشد. | (۴۲) |
تصدی عاملیت وجوه اداره شده برای کلیه اشخاص حقیقی و حقوقی
ارائه کلیه خدمات بانکی که در نتیجه آن هیچگونه تعهدی برای استفاده از منابع بانک ایجاد ننماید از جمله صدور کارت قرضالحسنه ، صدور انواع حواله ، ارائه خدمات حساب جاری، قبول امانات.
تاسیس و گسترش شبکه بانک در داخل و خارج از کشور و مناطق آزاد تجاری و صنعتی ویژه و فعالیت آنها صرفاً در قالب عقد قرض الحسنه ، با رعایت قوانین و مقررات مربوطه
قبول نمایندگی و کارگزاری موسسه های پولی و بانکی داخل و خارج از کشور پس از اخذ مجوزهای لازم از بانک مرکزی ج.ا.ا
بانک مجاز است سرمایه ثبتی خود را که متعلق به سهامداران است ، صرف خرید شعب ، دفاتر و تجهیزات، اوراق مشارکت و انجام فعالیت های اقتصادی مجاز با رعایت قوانین و مقررات جاری نماید.
مادۀ ۳ - مدت بانک
فعالیت بانک از تاریخ تأسیس به مدت نامحدود خواهدبود.
مادۀ ۴ – تابعیت و مرکز اصلی بانک
تابعیت بانک ایرانی است. مرکز اصلی بانک شهر تهران ، بلوار آفریقا ، خیابان ناهید شرقی ، پلاک ۳۵ در استان تهران است. انتقال مرکز اصلی بانک به هر شهر دیگر در داخل کشور منوط به تصویب مجمع عمومی فوقالعاده و تایید قبلی بانک مرکزی میباشد، لیکن تعیین و تغییر نشانی در همان شهر با تایید قبلی بانک مرکزی و بنا به تصویب هیئت مدیره صورت خواهد گرفت. هیئت مدیرۀ بانک میتواند در هر موقع در داخل یا خارج از کشور پس از اخذ مجوز از بانک مرکزی، شعبه یا نمایندگی دایر یا منحل نماید.
۲- ۳ – ۴ سرمایه و سهام
مادۀ ۵ – میزان سرمایه و تعداد سهام
سرمایۀ بانک مبلغ۰۰۰ /۰۰۰/۰۰۰/۵۰۰ ریال، پانصد میلیارد ریال است که به پانصد میلیون سهم عادی یکهزار ریالی با نام تقسیم شده و تماماً پرداخت گردیدهاست.
تبصره ۱: در صورتی که سرمایه بانک بر اثر زیان از مبلغ فوق کمتر شود بانک مکلف است حداکثر ظرف۶ ماه سرمایه خود را تکمیل نماید. در هر صورت بانک باید همواره مقررات کفایت سرمایهای را که بانک مرکزی وضع می کند رعایت کند.
تبصره۲: سقف مجاز تملک سهام به طور مستقیم یا غیر مستقیم برای هر شرکت سهامی عام یا تعاونی سهامی عام یا هر موسسه یا نهاد عمومی غیردولتی ده درصد (۱۰٪) و برای اشخاص حقیقی و سایر اشخاص حقوقی پنج درصد (۵٪) تعیین میشود. معاملات بیش از سقفهای مجاز در این تبصره توسط هر یک از اشخاص مذکور باطل و ملغیالاثر است. افزایش سقف سهم مجاز از طریق ارث نیز مشمول این حکم است و وراث و یا اولیاء قانونی آنها ملزم به فروش مازاد بر سقف، ظرف مدت دو ماه پس از صدور گواهی حصر وراثت خواهند بود. افزایش قهری سقف مجاز سهام به هر طریق دیگر باید ظرف مدت سه ماه به سقفهای مجاز این تبصره کاهش یابد. اشخاص حقیقی سهامدار بانک و اعضاء خانواده آنها شامل همسر، فرزندان و همسران آنان، برادر، خواهر، پدر و مادر منحصراً تا سقفی مجاز هستند سهام داشته باشند که نتوانند مشترکاً بیش از یک عضو هیات مدیره را در این بانک تعیین کنند.
تبصره ۳: اشخاص حقوقی غیربانکی که بخشی از سرمایه و یا سهام آنها متعلق به دولت و یا شرکتهای دولتی بوده و یا تحت مدیریت بخش دولتی قرار دارند، نمیتوانند در بانک سهامدار باشند.
تبصره ۴: هیچ یک از بانکها اعم از دولتی و غیردولتی و موسسات اعتباری نمیتواند در هیچ زمان بیش از یک درصد سهام بانک را دارا باشد.
مادۀ ۶ – ورقۀ سهم
کلیۀ سهام بانک با نام است. اوراق سهام بانک متحدالشکل، چاپی و دارای شمارۀ ترتیب بوده و باید به امضای دو نفر از مدیران بانک برسد.این اوراق باید ممهور به مهر بانک باشد.در ورقۀ سهم نکات زیر باید ذکرشود:
نام بانک و شمارۀ ثبت آن نزد مرجع ثبت شرکتها و سازمان بورس و اوراق بهادار،
شمارۀ ثبت اوراق نزد سازمان بورس و اوراق بهادار،
مبلغ سرمایۀ ثبت شده و مقدار پرداخت شده آن،
نوع سهام،
مبلغ اسمی سهم و مقدار پرداخت شده آن به عدد و حروف،
تعداد سهامی که هر ورقه نمایندۀ آن است،
نام و شمارۀ ملی دارندۀ سهم.
مادۀ ۷ – انتقال سهام
انتقال سهام بایستی در دفتر ثبت سهام بانک به ثبت برسد. انتقال دهنده یا وکیل یا نمایندۀ قانونی او، باید ثبت انتقال را در دفتر مزبور امضا نماید. هویت کامل و نشانی انتقال گیرنده نیز از نظر اجرای تعهدات ناشی از نقل و انتقال سهام باید در دفتر ثبت سهام قید شده و به امضای انتقال گیرنده یا وکیل یا نمایندۀ او برسد.
تملک یا تحصیل هر بخش از سهام بانک، متضمن قبول مقررات این اساسنامه و تصمیمات مجامع عمومی سهامداران است.
مادۀ ۸ – غیر قابل تقسیم بودن سهام
سهام بانک غیر قابل تقسیم است. مالکین مشاع سهام باید در برابر بانک به یک شخص نمایندگی بدهند.
۲- ۳- ۵ تغییرات سرمایۀ شرکت
مادۀ ۹ – مقررات حاکم بر تغییرات سرمایه
تغییرات سرمایۀ بانک با رعایت قوانین و مقررات مربوطه از جمله مفاد قانون تجارت، قانون بازار اوراق بهادار، دستورالعمل ثبت و عرضۀ عمومی اوراق بهادار مصوب شورای عالی بورس و رعایت حداقل سرمایه و سایر مصوبات شورای پول و اعتبار و کسب مجوز قبلی از بانک مرکزی انجام میشود.
مادۀ ۱۰ – تصویب تغییرات سرمایه
هرگونه تغییر در سرمایۀ بانک اعم از کاهش یا افزایش منحصراً در صلاحیت مجمع عمومی فوقالعاده است. دعوت از این مجمع برای بررسی موضوع تغییر سرمایه، موکول به اعلام تأیید سازمان بورس و اوراق بهادار مبنی بر رعایت قوانین و مقررات میباشد.
تبصره: مجمع عمومی فوقالعاده میتواند به هیئت مدیره اجازه دهد پس از اخذ مجوز از بانک مرکزی و سازمان بورس و اوراق بهادار، ظرف مدت معینی که نباید از دو سال تجاوز کند، سرمایۀ بانک را تا مبلغ معینی از طریقی که این مجمع مشخص نمودهاست، افزایش دهد.
مادۀ ۱۱ – شیوۀ افزایش سرمایه
سرمایۀ بانک با تصویب مجمع عمومی فوقالعاده و با رعایت مقررات مربوطه از طریق صدور سهام جدید قابل افزایش میباشد. تأدیۀ مبلغ اسمی سهام جدید به یکی از طرق زیر امکانپذیر است:
پرداخت نقدی مبلغ اسمی سهام،
تبدیل مطالبات نقدی حال شدۀ اشخاص از بانک به سهام جدید،
انتقال سود تقسیم نشده، اندوخته یا عواید حاصل از اضافه ارزش سهام جدید به سرمایۀ بانک،
تبصره: انتقال اندوختۀ قانونی به سرمایه ممنوع است.
مادۀ ۱۲ – تأدیۀ مبلغ سهم جدید از محل مطالبات
در صورت تصویب افزایش سرمایه از محل مطالبات نقدی سهامداران، در مجمع عمومی فوقالعاده، تأدیۀ مبلغ اسمی سهام جدید توسط سهامداران موکول به اعلام موافقت هر یک از آنان میباشد.
تبصره: مطالبات نقدی سهامداران بابت سود با تصویب یا اجرای افزایش سرمایه از این محل، حال شده تلقی گردیده و در صورت مطالبۀ سهامداران پرداخت میشود.
مادۀ ۱۳ – حق تقدم در خرید سهام جدید
در صورت تصویب افزایش سرمایه، صاحبان سهام بانک در خرید سهام جدید به نسبت سهامی که مالک میباشند، حق تقدم دارند. این حق قابل نقل و انتقال است. مهلت اعمال حق تقدم، بنا به پیشنهاد هیئت مدیره تعیین میشود. این مهلت از روزی که برای پذیرهنویسی تعیین میگردد، شروع شده و کمتر از ۶۰ روز نخواهد بود.
مادۀ ۱۴ – اعلام افزایش سرمایه و ارسال گواهیهای حق تقدم
گواهینامۀ حق تقدم باید توسط پست سفارشی قبل از شروع پذیرهنویسی به آخرین آدرس اعلام شدۀ سهامداران در بانک و یا شرکت سپردهگذاری مرکزی، ارسال شود.
اعلامیۀ پذیرهنویسی سهام جدید باید ضمن درج در روزنامۀ کثیرالانتشار بانک، از طریق سایت اینترنتی رسمی آن نیز به اطلاع سهامداران برسد.
مادۀ ۱۵ – صرف سهام
مجمع عمومی فوقالعاده میتواند به پیشنهاد و گزارش هیئت مدیره مقرر نماید که برای افزایش سرمایه، سهام جدیدی به مبلغی مازاد بر مبلغ اسمی سهم به فروش برسد، مشروط بر اینکه نحوۀ صرف اضافه ارزش سهام فروخته شده در همان مجمع تعیین گردد.
مادۀ ۱۶ – کاهش سرمایه
جدول ۳-۳- نمایش شماره دروس
نام درس
شماره درس
پس از مشخص شدن اندیسهای متغیر، متغیر صفر و یکی تعریف میگردد که در برگیرنده تمامی موارد فوق باشد.
i: به عنوان اندیس درس وارد مسئله میشود و مقادیر از یک تا تعداد کل دروس را میگیرد.
g: به عنوان اندیس کد بازهزمانی و روزهای هفته وارد مسئله میشود و مقادیر از ۱ تا ۳۰ را شامل می شود.
l: به عنوان اندیس استاد وارد مسئله میشود و مقادیر از یک تا تعداد کل اساتید را میگیرد.
I={{i ،…درس ۲،درس ۱ (۳-۱)
G= {،۲، ۱… ، g } (3-2)
L= {{l ،…استاد ۲،استاد ۱ (۳-۳)
متغیری با نام به صورت زیر تعریف خواهد شد که در ادامه در مدل ریاضی نمایش داده میشود.
(۳-۴)
=
۳-۱۰- روش حل مسئله برنامه ریزی دروس دانشگاهی
در این بخش ابتدا به روش حل کلی توسط الگوریتم ژنتیک اشاره میشود و به تبع آن شبهکد نوشته شده و روند حل مسئله بیان میشود.
۳-۱۰-۱- الگوریتمهای ژنتیک
الگوریتمهای ژنتیک دارای کاربرد گستردهای در زمینه های مختلف هستند. یک نمونه از این کاربردها، مسائل بهینه سازی چندبعدی میباشد که در آنها پارامترهای متفاوتی که قرار است بهینه شوند در قالب رشته کروموزوم سازماندهی میشوند.
در عمل، مدل ژنتیک محاسباتی میتواند با آرایهای از بیتها و یا کاراکترها در قالب کروموزوم پیادهسازی شود. به این ترتیب عملیاتهای ترکیب و جهش با دستکاری این بیتها یا رشته ها ممکن خواهند بود. هر چندتحقیقات زیادی بر روی رشته ها با طول متغیر و سایر ساختارها انجام شد اما عمده کاربران الگوریتمهای ژنتیک از رشتهای با طول ثابت به عنوان کروموزوم استفاده میکنند، به این ترتیب محقق با دو محدودیت یعنی طول ثابت رشته ها و نحوه ارائه مسئله در قالب این رشته ها مواجه است. نحوه کلی عملکرد الگوریتمهای ژنتیک مطابق با چرخه زیر میباشد:
ابتدا کلیه افراد موجود در جمعیت ارزیابی میشوند. سپس افراد جدید با بهره گرفتن از عملگرهای ترکیب و جهش تولید میشوند و افراد قدیمی و تکراری از جمعیت جدید حذف میگردند. یک تکرار از حلقه یاد شده تحت عنوان ایجاد یک نسل شناخته میشود. اولین نسل از این فرایند به صورت تصادفی ایجاد شده و سپس عملگرهای ژنتیک با اندازه گیری میزان شایستگی آنها جمعیت را از نظر کارایی برای حل مسئله مورد ارزیابی قرار میدهند (کیا، ۱۳۹۱).
۳-۱۰-۲- شبه کد الگوریتم در مدل پیشنهادی
برای به وجود آوردن یک رشته با طول ثابت به عنوان کروموزوم، ابتدا گروه های مختلف درسی به چهارگروه تفکیک و برای هر یک کروموزومی تشکیل شد، نحوه کار به این صورت است که با توجه به تعداد درسهای موجود در هر گروه و نیز کد بازههای زمانی که هر درس میتواند اختیار کند، ماتریسی با ابعاد و با اعداد صفر و یک تشکیل گردید. این اعداد صفر و یک با دستوراتی که در کد نوشته شده به صورت تصادفی یک جواب کاملا موجه درست میکنند، دستوراتی مانند اینکه در هر سطر برای دروس دو واحدی فقط یکی از سلولها مقدار یک را داشته باشد و برای دروس سه یا چهار واحدی تعداد دو تا از سلولها مقدار یک را داشته باشد. پس برای هر گروه ماتریسی با این ابعاد در نظر گرفته شده است.
بازههای زمانی
g = 1
۳-۳۹-۲٫ ضرورت انعطاف پذیری سازمان ها ۸۱
۴۰-۲٫ مراحل شکل گیری رفتار حرفه ای به شرح زیر است ۸۱
۴۱-۲٫ طراحی رفتار حرفه ای دارای اصول و ملاحظاتی به شرح زیر است ۸۱
۴۲-۲٫ اثرات فناورری اطلاعات بر توسعه حرفه ای کارکنان ۸۲
۴۳-۲٫ راه های افزایش توسعه حرفه ای و کارایی کارکنان در سازمان ۸۲
۱-۴۳-۲٫ آموزش ۸۳
۲-۴۳-۲٫چرخش شغلی ۸۳
۳-۴۳-۲٫ غنی سازی شغلی ۸۳
۴۴-۲٫ مفهوم توسعه حرفه ای منابع انسانی ۸۴
۱-۴۴-۲٫ توسعه حرفه ای منابع انسانی باید به دنبال ایجاد هدف های زیر باشد ۸۴
۴۵-۲٫ نقش آموزش درتوسعه حرفه ای نیروی انسانی ۸۵
۱-۴۵-۲٫ تاثیر آموزش ضمن خدمت بر توسعه حرفه ای و کارایی کارکنان ۸۶
۲-۴۵-۲٫ مزایای آموزش در توسعه حرفه ای نیروی انسانی ۸۶
۳-۴۵-۲٫ ویژگی های روش های آموزشی ۸۸
۴۶-۲٫ دلایل توجه به توسعه حرفه ای در کارکنان ۸۹
۱-۴۶-۲٫ افرادتوسعه یافته دارای ویژگی های زیر هستند ۸۹
۴۷-۲: هزینه های توسعه حرفه ای کارکنان ۸۹
۴۸-۲٫ راه کارهای عملی برای توسعه حرفه ای ۹۰
۴۹-۲٫ به طور کلی چهار گروه عمده درفعالیت های توسعه حرفه ای کارکنان نقش اساسی دارند ۹۰
۵۰٫ رویکردهایی برای توسعه حرفه ای کارکنان ۹۱
۱-۵۰-۲٫آموزش رسمی ۹۱
۲-۵۰-۲٫ ارزیابی ۹۱
۳-۵۰-۲٫ تجربیات شغلی ۹۲
۴-۵۰-۲٫ توسعه روابط بین فردی ۹۲
۵۱-۲٫ ویژگی های حرفه ای بودن کارکنان ۹۳
۱-۴۹-۲٫ آموزش ۹۳
۲-۴۹-۲٫ ارشاد ۹۳
۳-۴۹-۲٫ تعلق حرفه ای ۹۴
۴-۴۹-۲٫ شبکه سازی ۹۴
۵-۴۹-۲٫ محیط ۹۴
۶-۴۹-۲٫ سبک رهبری ۹۴
۵۲-۲٫ ابعاد امنیت شغلی که ازطریق توسعه حرفه ای منابع انسانی حاصل می شود عبارتند از ۹۵
۹۶
۵۳-۲٫ تحقیقات انجام شده در داخل کشور ۹۶
۵۴-۲٫تحقیقات انجام شده در خارج از کشور ۱۰۳
۱۰۷
۱۰۹
۱-۳٫ مقدمه ۱۱۵
۲-۳٫ روش تحقیق ۱۱۵
۳-۳٫ جامعه آماری ۱۱۶
۴-۳٫ حجم نمونه و روش نمونه گیری ۱۱۷
۵-۳٫ ابزار گردآوری داده های پژوهش ۱۱۹
۶-۳٫ روایی و پایایی ابزار گردآوری داده ها ۱۲۲
۷-۳٫ روش های تجزیه و تحلیل داده های پژوهش ۱۲۴
۱-۴٫ مقدمه ۱۲۷
آپوپتوز
۰۰۶/۰-r=
۰۰۰۱/۰*
۰۹۰/۰-r=
۳۳۰/۰
۱۷۸/۰r= 222/0
۴۰۲/۰r=
۰۰۰۱/۰*
۳۳۴/۰-r=
۰۰۱/۰*
۱۰۶/۰-r=
۰۰۰۱/۰*
*: معنی دار در سطح ۰۵/۰ (P value=0.05)
r: ضریب همبستگی
۳-۹- رابطه میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم با میزان آپوپتوز اسپرم
یک رابطه مستقیم (مثبت) بین میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم و میزان آپوپتوز نمونه ها دیده شد.
۳-۱۰- نتایج کلی
۱- پس از آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up میزان قابلیت حیات اسپرم به ۱۰۰ درصد رسید.
۲- در همه نمونه های مورد مطالعه پس از آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up میزان تحرک و مورفولوژی افزایش و درصد اسپرم های بی تحرک کاهش معنی داری را نشان دادند.
۳- بعد از آماده سازی اسپرم به روش Direct Swim-up درصد قطعه قطعه شدن DNA اسپرم به طور معنا داری کاهش داشت.
۴- بعد از انکوباسیون اسپرم در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد در زمان های مختلف(۳،۲،۱،۰) مشاهده شد که پس از گذشت دوساعت میزان قطعه قطعه شدن DNA و آپوپتوز اسپرم به طور معناداری افزایش نشان داد، که مشخص می کند بهترین زمان برای انکوباسیون اسپرم در دمای ۳۷درجه سانتی گراد زمان کمتر از دو ساعت برای نمونه های اسپرم نرمال می باشد.
فصل چهارم
بحث
۴-۱- تاثیر روش آماده سازی Direcct Swim up بر روی پارامترهای اسپرم
در این تحقیق همانطور که انتظار می رفت میزان تحرک اسپرم و اسپرم ها با مورفولوژی سالم و همچنین اسپرم های زنده نسبت به قبل از شستشوی اسپرم به روش Direct swim up افزایش چشمگیری داشتند و نیز میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم و آپوپتوز به طور معنی داری نسبت به قبل از آماده سازی اسپرم به روش Direct swim up کاهش نشان داد .
محققین دیگری نیز به نتایج مشابه ی در مورد بهبود پارامترهای اسپرم در روش Swim up دست یافتند، به طوری که اسپرم های جمع آوری شده، هم از نظر تعداد و هم از نظر مورفولوژ ی طبیعی از میزان بیشتری نسبت به رو ش های د یگر برخوردار بود(Michaeli, Peer, Anderman, Ballas, & Ellenbogen, 2004). بعضی از محققین با مقایسه دو روش Swim up و Percoll Gradient به این نتیجه رسیدند که اگرچه تعداد اسپرم در روش Percoll به صورت معنی داری بیشتر از روش Swim up است ولی درصد حرکت پیشرونده در روش Swim up بیشتر است . همچنین این روش بر ای افزایش قابلیت باروری در سیکل های درمانی و حذف اسپرم هایی که از بلوغ کمتری برخوردار بوده و یا در مرحله آناپلوئیدی به سر می برند؛ مناسب می باشد (Jakab, et al., 2003). علی رغم این که روش های مختلفی برای جداسازی اسپرم وجود دارد؛ اما بسیاری همچنان بر روش شستشو و Swim up مایع سیمن تاکید داشته و آن را برای دستیابی به اسپر م های با حرکت بیشتر و پیشرونده، مناسب می دانند(Paasch, Grunewald, & Glander, 2007). یکی دیگر از پارامترها ی اصلی اسپرم ، میزان مورفولوژ ی طبیعی آن است که نقش تعیین کنند ه ای در باروری افراد دارد . لذا اگر طی انجام روشی، بتوان میزان بیشتری از اسپر م های طبیعی را جمع آوری نمود ؛ مسلما میزان باروری نیز افزایش خواهد یافت. Scott به مقایسه تاثیر یک بار و دوبار شستشو در روش Swim up بر مورفولوژی سر اسپرم پرداخت و به این نتیجه دست یافت که دو بار شستشو در روش Swim up باعث می گردد تا اسپرم هایی که دارای شکل طبیعی و دار ای واکنش آکروزومال بهتر ی هستند ؛ جدا شوند و یا اسپرم هایی جدا شوند که از توانایی بیشتری در مقابل محیط هیپواسماتیک برخوردارند (Esteves, Sharma, Thomas Jr, & Agarwal, 2000).. عده ای نیز بر این باورند که در روش Swim up میزان قطعه قطعه شدن DNA نیز به صورت معنی داری کاهش می یابد(Younglai, Holt, Brown, Jurisicova, & Casper, 2001). نتیجه این تحقیق موید آن است که کاهش میزان میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم می تواند باعث افزایش لقاح و تشکیل جنین در روش های کمک باروری (ART) و همچنین افزایش میزان حاملگی و تولد نوزاد زنده شود. بعضی از مطالعات نشان می دهد که اگرچه روش Swim up شاید کمک چندانی به نمونه های طبیعی ننماید و حتی ممکن است در این خصوص روش هایی مثل Percoll Gradient بهتر از آن عمل نماید ولی این روش در نمونه های اولیگواسپرمی، آستنواسپرمی و تراتواسپرمی کاملاً تاثیر خود را نشان داده و باعث می گردد تا اسپرم های طبیعی بیشتری جدا شوند و درمان ناباروری از نتا یج بهتر ی برخوردار باشد(Adiga & Kumar, 2001). به همین دلیل، بعضی از محققین انجام Swim up double washing را پیشنهاد داده و معتقدند که این روش مخصوصاً برای انجام IVF که اسپرم ها باید در اطراف اووسیت قرار گرفته و در محیط انکوباتور، لقاح انجام پذیرد ؛ بسیار مناسب بوده و نتایج بهتری را دنبال خواهد داشت (Chen, et al., 1995). همین ایده در روش آماده سازی اسپرم بر ای انجام IUI نیز وجود داشته و بس یار موثر بوده؛ منتها روش Swim up تک مرحله ای آسان تر و کم هزینه تر بوده است(Inaudi, Petrilli, Joghtapour, Trusso, & Petraglia, 2002).
برخی دیگر بر این باورند که swim up باعث می گردد تا تعداد و حرکت اسپرم ها در افرادی که نرموآزواسپرمی و یا آستنوتترازوسپرمی هستند، افزایش یابد(Purvis & Egdetveit, 1993) و یا اینکه با حذف اسپرم هایی که از بلوغ کمتری بر خوردار ند(Scott, Oehninger, Menkveld, Veeck, & Acosta, 1989) و همچنین کاهش میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم(Younglai, et al., 2001) و جدا شدن اسپرم هایی که با سر بیضی شکل خود دارای ناحیه آکروزومی بزرگتری هستند (Dominguez, Burgos, & Fornes, 1999)، لقاح نیز افزایش یافته و به ازای هر سیکل ممکن است تا ۱۰ درصد حاملگی نیز افزایش نشان دهد. پس می توان به این نتیجه رسید که روش Direct swim up یک روش مناسب برای آماده سازی نمونه های سیمن برای استفاده در تکنیک های کمک باروری مخصوصا برای استفاده در روش IUI به این دلیل که در این روش معمولا از نمنوه های نرمال استفاده شده و روش Direct swim up بسیار مناسب برای نمونه های نرمال است .
۴-۲- تاثیر زمان های مختلف انکوباسیون اسپرم در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد بر روی قطعه قطعه شدن DNA و آپوپتوز اسپرم
انکوباسیون اسپرم آماده شده و شسته شده در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد برای استفاده در تکنیک های کمک باروری (ART) امری واجب و معمول است که در مراکز ناباروری صورت می گیرد. بررسی تاثیر انکوباسیون آزمایشگاهی اسپرم از تحقیقات و پژوهش هایی است که مورد توجه محققین در دهه ی اخیر قرار گرفته است. تحقیقات اولیه در مورد اثر انکوباسیون اسپرم بر روی پارامترهای اسپرم نظیر تحرک، قابلیت حیات و مورفولوژی بوده است. با مشخص شدن نقش مهم سلامت و کیفیت DNA اسپرم در باروری و موفقیت تکنیک های کمک باروری و همچنین معرفی تکنیک های جدید برای ارزیابی وضعیت و سلامت DNA اسپرم مثل بررسی آپوپتوز اسپرم به وسیله ی تکنیک TUNEL، بررسی ساختار کروماتین اسپرم توسط روش SCSA، مشخص کردن قطعه قطعه شدن DNA اسپرم به وسیله تست SCD و روش comet می توان اشاره کرد.بسیاری از گروه های تحقیقاتی تلاش های زیادی برای پیدا کردن ارتباط بین انکوباسیون کوتاه مدت و طولانی مدت سلول های اسپرم با یکپارچگی DNA اسپرم انجام داده اند(Calamera, et al., 2001; Matsuura, Takeuchi, & Yoshida, 2010; Muratori, et al., 2003; Zhang, et al., 2011). ما در این مطالعه آینده نگر سعی داشتیم اثر زمان های مختلف بر روی میزان قطعه قطعه شدن DNA و آپوپتوز سلول های اسپرم نرمال آماده شده به روش Direct swim-up در اثر انکوباسیون در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد را پیدا کنیم، که بررسی میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم را با بهره گرفتن از تست SCD و بررسی میزان آپوپتوز اسپرم به وسیله تکنیک TUNEL صورت گرفت.
نتیجه ای که ما در این مطالعه به دست آوردیم نشان داد که بعد از گذشت دو ساعت انکوباسیون اسپرم در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم و آپوپتوز به میزان قابل توجهی افزایش پیدا می کند. به تازگی Matsuura وهمکاران در سال ۲۰۱۰ اثر انکوباسیون اسپرم در انکوباتور ۳۷ درجه سانتی گراد بدون CO2 و دارای CO2 را بر روی میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم بررسی کردند. آنها دریافتند که پس از گذشت ۳ ساعت و ۲۴ ساعت میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم در انکوباتور CO2 دار نسبت به بدون CO2 به صورت معنی داری بالا بوده و همچنین میزان قطعه قطعه شدن DNA و آپوپتوز اسپرم در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد نسبت به دمای اتاق به صورت معنی داری بالا بوده است. آن ها از روش SCSA برای بررسی میزان قطعه قطعه شدن DNA استفاده کردند (Matsuura, et al., 2010). Dalzell و همکاران در سال ۲۰۰۴ نشان دادند که DNA اسپرم حاصل از عمل TESE بعد از گذشت ۴ ساعت انکوباسیون در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد دچار آسیب می شود. (Dalzell, McVicar, McClure, Lutton, & Lewis, 2004).
Hammadeh و همکاران در سال ۲۰۰۱ نشان دادند که انکوباسین اسپرم در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد بازشدگی و خارج شدن از حالت فشرده هسته اسپرم هنگام لقاح با تخمک را کاهش می دهد. آن ها مشاهده کردند که بعد از دو ساعت انکوباسیون میزان عدم خروج هسته ی اسپرم از حالت فشرده از ۲۵ درصد به ۸۸ درصد افزایش پیدا می کند(Hammadeh, Strehler, Zeginiadou, Rosenbaum, & Schmidt, 2001).
در یک مطالعه انجام شده توسط Fernandez وهمکاران در سال ۲۰۰۷ در مورد پویایی قطعه قطعه شدن DNA اسپرم اسب نر بوده است نشان دادندکه بیشترین میزان آسیب که به DNA اسپرم وارد شده زمان های بیش از ۶ ساعت انکوباسیون اسپرم در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد می باشد. در این تحقیق از تست SCD برای بررسی میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم استفاده شده بود. همچنین اثر مضر دیگری که انکوباسیون اسپرم در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد روی اسپرم می گذارد تغییرات مورفولوژیکی سر اسپرم است که میزان باروری اسپرم را تحت تاثیر قرار می دهد و باعث کاهش میزان باروری اسپرم می شود(López-Fernández, et al., 2007). Peer و همکاران نشان دادند که میزان قطعه قطعه شدن DNA اسپرم و آپوپتوز اسپرم های دارای واکوئل بعد از دو ساعت انکوباسیون در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد نسبت به دمای ۲۱ درجه سانتی گراد به میزان معنی داری افزایش پیدا می کند(Peer, et al., 2007).
نتایج و یافته هایی که ما در این مطالعه به دست آوردیم با یافته های دیگر محققان در مورد قطعه قطعه شدن DNA اسپرم پس از آماده شدن به روش Direct swim-up مشابه است(Muratori, et al., 2003; Zhang, et al., 2011). Zhang و همکاران در سال ۲۰۱۱ نشان دادند که قطعه قطعه شدن DNA اسپرم انسانی پس از ۴ ساعت انکوباسیون در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد افزایش می یابد، در حالی که آن ها هیچ تفاوت معنی داری را پس از دو ساعت انکوباسیون اسپرم در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد مشاهده نکردند(Zhang, et al., 2011). ممکن است علل احتمالی این نتایج به خاطر روش آماده سازی اسپرم باشد. Zhang و همکاران اسپرم را به روش Indirect swim-up آماده کردند در حالی که ما به روش Direct swim-up آماده سازی و شستشوی اسپرم را انجام دادیم و همچنین محیط کشتی که برای آماده سازی و نگهداری اسپرم Zhang و همکاران استفاده کردند با مطالعه ی ما متفاوت بوده است به طوری که Zhang و همکاران از محیط Ham’s F10 همراه با G-IVF استفاده کردند در حالی که ما از Ham’s F10 به همراه آلبومن ۵ درصد استفاده کردیم. یکی دیگر از تفاوت هایی که وجود داشته است نحوه ی انکوباسیون اسپرم بوده است که Zhang و همکاران اسپرم را در انکوباسیون CO2 دار ۵ درصد در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه کردند در حالی که ما اسپرم را در انکوباسیون بدون CO2 در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه کردیم.
نتایج ما متضاد و ناسازگار با نتایج Calamera و همکاران است که در سال ۲۰۰۱ انجام دادند آنها ارزیابی اثر گذشت زمان ( بلافاصله پس از شستشوی اسپرم به روش Swim-up تا ۴۷ ساعت) بر روی پارامترهای اسپرم و یکپارچگی DNA را انجام دادند و دریافتند که تفاوت معنی داری بین زمان های مختلف انکوباسیون بر روی قطعه قطعه شدن DNA اسپرم وجود ندارد(Calamera, et al., 2001). یکی از علت های احتمالی ممکن است مربوط به روش مورد استفاده برای ارزیابی قطعه قطعه شدن DNA باشد که مورد استفاده قرار گرفته است. آن ها از روش آکریدین اورنژ (AO) برای بررسی یکپارچگی DNA اسپرم مورد استفاده قرار دادند. در حالی که ما در این تحقیق از روش SCD برای بررسی قطعه قطعه شدن DNA اسپرم و از تکنیک TUNEL برای بررسی آپوپتوز اسپرم استفاده کردیم. روش های آکریدین اورنژ ، SCD و TUNEL ودیگر روش های بررسی آسیب DNA روش های متغیر وابسته به فرد هستند، یعنی ممکن است