وبلاگ

رشت کرم ساقه خوار برنج IRAN437C متاریزیوم آنیزوپلیه ۱۰۷×۴/۲ ۱۰۹×۴/۲ ۱۰۱۱×۴/۲ اهواز ملخ IRAN715C متاریزیوم آنیزوپلیه ۱۰۷×۴/۲ ۱۰۹×۴/۲ ۱۰۱۱×۴/۲ سراوان سوسک سرخرطومی حنایی خرما DEMI001 متاریزیوم آنیزوپلیه ۱۰۷×۴/۲ ۱۰۹×۴/۲ ۱۰۱۱×۴/۲ نور M14 متاریزیوم آنیزوپلیه ۳-۲-۲-۲- کشت قارچ ها: جهت کشت قارچ ها در شرایط استریل ابتدا سطح میز با پنبه الکل تمیز شد، سپس در کنار شعله به وسیله آنس فلزی مقداری از پرگنه های محیط منبع به محیط کشت منتقل شد. به این صورت از هر جدایه تعدادی کشت تهیه شد. کشتها برای ۱۴ روز در انکوباتور ۲۵ درجه نگهداری شدند، و از نظر رشد قارچ مورد بررسی قرار گرفتند. پایان نامه - مقاله - پروژه ۳-۲-۲-۳- تهیه سوسپانسیون کنیدیوم: برای تهیه سوسپانسیون کنیدیومی، سطح محیط های کشت توسط آب مقطر همراه با توئین ۸۰ (Tween 80) با غلظت ۰۱/۰ درصد شستشو داده شد. توئین ۸۰ با کاهش کشش سطحی، باعث میشود کنیدیوم ها از محیط راحت تر جدا شوند. برای این منظور ابتدا سطح میز با پنبه الکل تمیز شد، سپس در کنار شعله مقدار کمی محلول توئین ۸۰ در یکی از پلیت ها ریخته و سطح محیط کشت با بهره گرفتن از پیپت پاستور استریل که با حرارت مجرای آن بسته شده بود تراشیده و شستشو گردید. همین سوسپانسیون روی محیط دیگر ریخته شد و عمل تکرار شد. سوسپانسیون حاصله از ۴ لایه گاز استریل گذرانده شد تا قطعات میسلیومها جدا شوند. از محلول صاف شده با بهره گرفتن از سمپلر یا پیپت پاستور برداشت و با بهره گرفتن از لام هموسیتومتر (نئوبار) اقدام به شمارش اسپور ها جهت تهیه رقت پایه (۱۰۷ ×۴/۲ کنیدی در میلی‏لیتر) گردید. ۳-۲-۲-۴- تهیه اسلاید کالچر (Slide culture): روش کشت روی لام برای کمک به شناسایی قارچ های رشتهای، که به سختی با روش تهیه تیزمانت شناسایی میشوند، انجام میشود. این روش در واقع روش مطمئنی برای تشخیص قارچ‏ های مختلف است چرا که بسیاری از قارچ ها را با توجه به شکل آنها در محیط های کشت و رنگ کلنی و پرگنه ها نمیتوان تشخیص داد. جهت تهیه اسلاید کالچر به ازای هر جدایه قارچی یک عدد لام و تعدادی لامل و یک لوله شیشهای U و یا V شکل در داخل پتریدیش قرار داده و مجموعه در اتوکلاو ۱۲۱ درجه به مدت ۱۵ دقیقه گذاشته شد. سپس محیط کشت آماده، توسط اسکالپل استریل به مربعهای مساوی و کوچک، حدود یک سانتیمتر مربع بریده شد و یک عدد از این قطعات روی لامی قرار گرفت و این لام روی لوله شیشهای U شکل درون پتری دیش قرار گرفت، با بهره گرفتن از آنس با رعایت شرایط استریل در زیر هود و در کنار شعله از هر کدام از قارچ های کشت شده به طور جداگانه برداشت و روی اضلاع قطعات فوق الذکر تلقیح گردید و در مرحله بعد لامل با کمی اعمال فشار روی قطعات تلقیح شده با قارچها قرار داده شد. این عمل برای ۴ جدایه انجام گردید و مقداری آب مقطر استریل برای حفظ رطوبت و جلوگیری از خشک شدن محیط، به کف ظروف پتری اضافه گردید. کشت ها به مدت ۱۴ روز در انکوباتور ۲۵ درجه نگهداری شدند، و طی این مدت به طور مرتب با استفاده لوپ از نظر رشد قارچ بررسی شدند. پس از رشد و کنیدیوم زایی با بهره گرفتن از یک پنس، لامل موجود روی هر کدام از محیط ها به آرامی برداشته شد، یک قطره لاکتوفنل کاتن بلو روی لام دیگری قرار گرفت و لامل به آرامی روی لاکتوفنل به شکلی که حباب هوا تشکیل نشود قرار داده شد و سپس اقدام به مشاهده آنها در زیر میکروسکوپ گردید. ۳-۳- طرز آلوده کردن کنه ها با سوسپانسیون کنیدیوم قارچ: کنه ها بلافاصله پس از رسیدن به آزمایشگاه در الکل اتیلیک۷۰% ضد عفونی شدند. سالم بودن کنههای بالغ مهم بود و در اسرع وقت پس از جمع آوری مورد ارزیابی قرار گرفتند. کنه های صدمه دیده و تغییر رنگ داده حذف شدند. کنه های سالم دارای حرکت بودند و برای ارزیابی چنانچه کنه ها در زیر یک منبع نور قرار می گرفتند به سمت نور حرکت میکردند ]۱۷.[ برای انجام آزمایش، سوسپانسیونی حاوی ۱۰۷×۴/۲، ۱۰۹×۴/۲ و ۱۰۱۱×۴/۲ کنیدیوم در هر میلی لیتر از هر کدام از ۴ جدایه تهیه گردید و در یخچال با دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری شد. برای هر جدایه قارچی سه گروه درمان (۳ بارتکرار) از هر کنهی مورد آزمایش، در غالب گروه های ۱۰ تایی کنه در نظر گرفته شد، هم چنین ۳۰ عدد کنه به عنوان گروه کنترل منفی در سه گروه ۱۰ تایی جای گرفتند که در مجموع تعداد ۳۹۰ کنهی هیالوما مارجیناتوم بالغ مورد استفاده قرار گرفت. در گروه های درمان، کنه ها به صورت انفرادی به وسیلهی پنس استریل ۵-۳ ثانیه در سوسپانسیون قارچی مربوطه و در گروه کنترل منفی نیز کنه ها ۵-۳ ثانیه در آب مقطر استریل همراه با توئین ۸۰ بدون اسپور، غوطه ور شدند. پس از غوطه وری، کنه ها به پتریدیشهایی کهتیمار اول کوددهی به میزان ۱۵۰ کیلوگرم در هکتار کود اوره (N1)، تیمار دوم به میزان ۲۵۰ کیلوگرم در هکتار (N2) ، و برای تیمار سوم ۳۵۰ کیلوگرم در هکتار (N3) تعیین گردید و همراه با آب آبیاری به زمین داده شد. کودهای ازته به صورت محلول و در دو مرحله به زمین شد. اولین کوددهی در ۳۱ اردیبهشت ۱۳۸۶ با مقادیر ۵۰، ۱۰۰ و ۱۵۰ کیلوگرم در هکتار در تیمارهای N1، N2 و N3 و دومین کوددهی در دوم تیر ۱۳۸۶ با مقادیر ۱۰۰، ۱۵۰ و ۲۰۰ کیلوگرم در هکتار صورت گرفت. مقادیر عمق سطح ایستایی در سناریوهای مختلف آبیاری و مقادیر غلظت نیتروژن نیتراتی (NO3-N) ، در نیمرخ خاک از یازدهم اردیبهشت معادل اول ماه مه تا هشتم مهرماه معادل آخر ماه سپتامبر و نیز تلفات آبشویی نیترات و دنیتریفکاسیون و جذب نیترات توسط گیاه در ماه های مختلف فصل رشد پس از کوددهی یعنی از خرداد تا شهریور ماه برای این قطعه زراعی توسط مدل برآورد گردیده است. لازم به ذکر است که تیمار N1 شامل موارد I1N1، I2N1، I3N1 و تیمار N2 شامل موارد I1N2 ، I2N2 و I3N2 و تیمار N3 شامل موارد I1N3، I2N3 و I3N3 می باشد. ۳-۲- بررسی روند تغییرات غلظت نیترات شبیه سازی شده در نیمرخ خاک توسط NLEAP جدول (۳-۱) نشان دهنده مقادیر اندازه گیری شده غلظت اولیه نیترات در نیمرخ خاک در ابتدای دوره شبیه سازی است که برای پیش بینی غلظت نیترات در اعماق مختلف خاک در طول دوره شبیه سازی به مدل معرفی شد. جدول۳- ۱) غلظت اولیه نیترات خاک اندازه گیری شده (بهمنی، ۱۳۸۸) ۱۲۰ ۹۰ ۶۰ ۳۰ عمق (سانتی متر) ۲۷ ۹/۱۹ ۷/۹ ۳/۹ (میلی گرم بر لیتر) ۱/۶ ۵/۴ ۲/۲ ۱/۲ (میلی گرم بر کیلوگرم خاک) ۳-۲-۱- بررسی روند تغییرات غلظت نیترات خاک شبیه سازی شده در تیمار N1 در شکلهایزیر، روند تغییرات غلظت نیترات خاک پیش بینی شده و اندازه گیری شده در نیمرخ خاک از سطح تا عمق عمق ۱۲۰ سانتی متر در تیمار N1نمایش داده شده است. شکل۳- ۱) مقادیر شبیه سازی و اندازه گیری شده مقدار نیترات باقیمانده در عمق ۶۰-۳۰ سانتیمتری خاک در تیمار N1 (شبیه سازی= S، اندازه گیری= m) شکل۳- ۲)مقادیر شبیه سازی و اندازه گیری شده مقدار نیترات باقیمانده در عمق ۹۰-۶۰ سانتیمتری خاک در تیمار N1 (شبیه سازی= S، اندازه گیری= m) I3N1 I2N1 I1N1 شکل۳- ۳) مقادیر شبیه سازی و اندازه گیری شده مقدار نیترات باقیمانده در عمق ۱۲۰-۹۰ سانتیمتری خاک در تیمار N1 (شبیه سازی= S، اندازه گیری= m) در جدول (۳-۲)، نیز نتایج ارزیابی آماری شبیه سازی نیترات خاک توسط مدل NLEAPدر اعماق مختلف خاک در تیمار N1نشان داده شده است. جدول۳- ۲) مقایسه آماری مقادیر نیترات شبیه سازی شده و اندازه گیری شده برای اعماق مختلف خاک در تیمار N1 عمق خاک NLEAP حاوی کاغذ صافی (کاغذ واتمن) مرطوب بود منتقل گردیدند. سپس در ژرمیناتور با دمای ۲۵ درجه سانتیگراد و رطوبت ۷۰ درصد قرار گرفتند. لازم به ذکر است کاغذ های واتمن قبل از استفاده اتو کلاو شدند و هر روز پس از مطالعه کنه ها چند قطره آب مقطر استریل به کف ظروف جهت تامین رطوبت اضافه گردید. تمامی گروه های مورد آزمایش به صورت روزانه، به مدت ۲۰ روز مورد مشاهده و بازبینی قرار گرفتند و تلفات و رشد قارچ روزانهی آنها ثبت شد. ۳-۴- روش آنالیز اطلاعات بدست آمده: متوسط درصد آلودگی و تلفات کنه هیالوما مارجیناتوم در مطالعه حاضر در یک طرح خرد شده با در نظر گرفتن اثرات اصلی هفته، نوع قارچ، غلظت قارچ و تداخل سه طرفه با کمک رویه GLM (General linear Model) مورد آنالیز واریانس (Analysis at variance) دوطرفه قرار گرفت. تست توکی (Tukey) برای مقایسه میانگین ها مورد استفاده قرار گرفت. نتایج به صورت حداقل مربعات میانگین و خطای معیار میانگین بیان شد. مقادیر۰۵/۰≥p به عنوان معنادار تلقی گردید. نرم افزار آماری SAS (Statistical Analysis system) برای تخمین اطلاعات مورد استفاده قرار گرفت.