وبلاگ

…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۸۴
۳-۶-۲-تهیه لوله بذر ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۸۴
۳-۶-۳- اطمینان از خالص بودن سوش …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۸۵
۳-۶-۴- تست سوش برای تولید اگزوتوکسین A ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….85

۳-۶-۵-تهیه محیط کشت ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۸۵
۳-۶-۷- رسوب با استات روی ۱ مولار ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۸۷
۳-۶-۸- رسوب با سولفات آمونیوم ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۸۷
۳-۶-۹- دیالیز اگزوتوکسین A …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..88
۳-۶-۱۰- کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل اگزوتوکسین A ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………89
۳-۱۶-۲-۱مواد مورد نیاز: …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۸۹
۳-۶-۱۱سنجش تولید اگزوتوکسین A ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….89
۳-۶-۱۱-۱-سنجش توکسیسیتی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۰
۳-۶-۱۲- دتوکسیفای کردن اگزوتوکسین A به روش فرمآلدیئد …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۹۱
۳-۷- ژل فیلتراسیون جهت تخلیص کونژوگه PRP هموفیلوس آنفولانزای تیپb (Hib) با اگزو توکسین A سودوموناس آئروژینوزا …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۲
۳-۸- آزمون های کنترل و کیفی کونژوگه ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۲
۳-۹- سنجش پروتئین …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۲
۳-۱۱- تعیین میزان اسید نوکلئیک …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۹۳
۳-۱۲- کنترل توکسیسیته غیرعادی((Abnormal toxicity ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………94
۳-۱۳- آزمون پیروژنی ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۴
۳-۱۴- ایمیونیزاسیون خرگوشها و خونگیری …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۴
۳-۱۵تهیه بافر باربیتال : ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۹۴
۳-۱۶- تهیه محلول کوماسی بلو و رنگ بر : ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۴
۳-۱۶- پلی آکریل آمید ژل الکتروفورز درحضور سدیم دو دسیل سولفات(SDS-PAGE) ………………………………………………………..96
۳-۱۶-۱- اصول روش SDS-PAGE …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….96
۳-۱۶-۳- محلول­های مورد نیاز ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۷
۳-۱۶-۴- تهیه ژل پایین SDS-PAGE ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….97
۳-۱۶-۵- تهیه ژل بالا با SDS-PAGE …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………98
۳-۱۶-۶-رنگ آمیزی ژل پلی آکریل آمید ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۹
۳-۱۶-۷- محلول­های مورد نیاز ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۰۰
۳-۱۶-۸- روش رنگ آمیزی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۰۱
۳-۱۷- آزمون بررسی فعالیت باکتریسیدالی سرم حیوان ایمیون (SBA^[1]) ………………………………………………………………………………………………………………………………….101
۳-۱۷-۱- اصول آزمون SBA ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….101
۳-۱۷-۲- مواد مورد نیاز برای آزمون SBA Serum Bactericidal Assay)) …………………………..101
۳-۱۷-۳-روش انجام آزمون ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۰۲
فصل چهارم: نتایج
۴-۱-کشت سویه باکتری……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۰۷
۴-۲- شرایط کشت در فرمانتور……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۱۰۸
۴-۳- تعیین خلوص PRP ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..109
۴-۴- اندازه‌گیری میزان ریبوز ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۱۱
۴-۵- کنترل میزان پروتئین در پلی ساکارید PRP و ETA و PRP- ETA……………………………………………………………………………………………………………..113
۴-۶- کنترل میزان اسید نوکلئیک در پلی ساکارید PRP و PRP- ETA………………………………………………………………………………………………………………………..113
۴-۷- کونژوگاسیون PRP با اگزوتوکسینA سودوموناس آئروژینوزا……………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۱۴
۴-۸- بازده کونژوگاسیون PRP-ETA ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………115
۴-۹- کنترل پیروژنی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۱۱۵
۴-۱۰- کنترل توکسیسیتی غیر عادی در موش سوری……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۱۶
۴-۱۱- آزمون ایمونوژل دیفیوژن…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۱۶
۴-۱۲- الکتروفورز (SDS-PAGE) برای بررسی وزن مولکولی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۱۷
۴-۱۳- ارزیابی فعالیت باکتری کشی سرم حیوان واکسینه شده ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۱۷
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری
۵-۱- واکسن‌های کونژوگه‌ی (Hboc) PRP-CRM197………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….124
۵-۲- واکسن کونژوگه‌ی PRP-TT ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..125
۵-۳- واکسن کونژوگه‌ی PRP-OMP ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..125
۵-۴- تولید کپسول هموفیلوس آنفولانزای تیپ b(PRP) …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..126